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簡(jiǎn)要描述:PCR檢測試劑盒在聚合酶鏈式反應實(shí)驗中發(fā)現,DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。
詳細介紹
PCR檢測試劑盒技術(shù)原理:
DNA的半保留復制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實(shí)驗中發(fā)現,DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 貨號 |
PCR檢測試劑盒 | 50次 | BK-P9536 |
原理是由一對引物介導,能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實(shí)性;
?
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
雞C反應蛋白(CRP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
雞B因子(BF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
雞5核苷酸酶(5-NT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
雞17-酮類(lèi)固醇(17-KS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
雞17羥皮質(zhì)類(lèi)固醇(17-OHCS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
雞1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
雞1,25二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
M1(AFM1)ELISA 試劑盒 48T/96T 試劑盒
B1(AFB1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
素(Aflatoxin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
槐凝集素(SJA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
花生凝集素(PNA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
猴子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體3(TRAIL-R3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
猴子乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
PCR檢測試劑盒葡萄糖轉運蛋白2抗體 規格: 0.1ml 英文名稱(chēng):GLUT2
G蛋白偶聯(lián)受體52抗體 規格: 0.2ml 英文名稱(chēng):GPR52
G蛋白偶聯(lián)受體115抗體 規格: 0.2ml 英文名稱(chēng):GPR115
G蛋白偶聯(lián)受體151抗體 規格: 0.2ml 英文名稱(chēng):GPR 151
葡萄糖苷酶2β/Glucosidase IIβ抗體 規格: 0.2ml 英文名稱(chēng):Glucosidase 2 subunit beta
轉錄因子Gli3抗體 規格: 0.2ml 英文名稱(chēng):Gli3
核突觸蛋白-γ抗體 規格: 0.1ml 英文名稱(chēng):gamma Synuclein
小鼠抗人血紅蛋白單克隆抗體 規格: 0.2ml 英文名稱(chēng):hHb(H5A3)
組胺受體H1抗體 規格: 0.1ml 英文名稱(chēng):HRH1
HER2受體抗體 規格: 0.1ml 英文名稱(chēng):HER2 receptor(NT)
A型禽流感病毒H7N9 M1蛋白抗體 規格: 0.2ml 英文名稱(chēng):H7N9 Matrix Protein 1
人乙型肝炎核心抗原單克隆抗體 規格: 0.1ml 英文名稱(chēng):HBcAg(1H8)
熱休克蛋白-22抗體 規格: 0.1ml 英文名稱(chēng):HSP22
磷酸化組蛋白H1.4抗體 規格: 0.1ml 英文名稱(chēng):phospho-Histone H1.4(Thr18)
葡萄糖氧化酶1抗體 規格: 0.1ml 英文名稱(chēng):HAO1
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